人BIGH3基因克隆表达对兔角膜基质细胞黏附和迁移的影响

• 作者: 刘含若 刘平 张毅 杨帆 石妍 葛红岩
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: BIGH3基因 角膜细胞 黏附 迁移 组织构建
• 年，卷（期）: 2010,（50）
• 页码范围: 9361-9365
• 分类号: R318
• 字数: 5478字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.50.013

摘要

背景:BIGH3蛋白位于角膜上皮和基质层,在基质层高表达,先前研究已经发现BIGH3蛋白能促进角膜上皮创伤愈合,为此进一步探讨其对角膜基质创伤愈合的影响.目的:构建人BIGH3基因的原核表达载体,观察其对角膜细胞与细胞外基质黏附和迁移的作用.方法:PCR扩增BIGH3基因的ORF阅读框,并通过Kpn Ⅰ和Sal Ⅰ插入到原核表达载体pET32a(+)中.经PCR、酶切和序列测定方法鉴定重组质粒.将重组质粒转入BL21(DE3)表达,IPTG诱导表达人BIGH3融合蛋白,并进行SDS-PAGE电泳分析和Western blot检测分析:以Ni-NTA树脂对蛋白纯化与复性,作用于体外培养的兔角膜细胞,用MTT法分析其对细胞与细胞外基质黏附的影响,采用改良的Boyden微孔膜双槽法观察BIGH3蛋白对角膜细胞迁移的影响.结果与结论:重组质粒经PCR、酶切与DNA测序证实插入了pET32a(+)载体中.通过IPTG诱导,成功的表达融合蛋白在包涵体中,经SDS-PAGE电泳分析,出现了一条新生的蛋白条带,Western blot也证实了该蛋白具有与BIGH3抗体特异性的结合能力.MTT法和Boyden微孔膜双槽法分别证明所表达的BIGH3融合蛋白可促兔角膜细胞黏附和迁移.成功构建了人BIGH3重组融合蛋白表达质粒,纯化了该基因的原核表达产物,并通过重组融合蛋白BIGH3能促进兔角膜细胞与细胞外基质黏附及迁移,而验证了重组BIGH3蛋白的活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘平		211	863	12.0	19.0
2	葛红岩		37	157	6.0	10.0
3	石妍		7	18	2.0	4.0
4	杨帆		38	173	8.0	11.0
5	张毅		20	115	7.0	10.0