构建携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因腺病毒表达载体在骨髓基质干细胞中的表达

• 作者: 刘丹平 李谌 王国贤 胡亮
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨缺损 VEGF121 hrGFP-1 腺病毒载体 绿色荧光蛋白 基因治疗
• 年，卷（期）: 2010,（45）
• 页码范围: 8539-8543
• 分类号: R394.2
• 字数: 721字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.45.042

摘要

背景:血管内皮生长因子具有促进血管生成的作用,在骨缺损的治疗研究中运用较多,但其异构体VEGF121的研究较少.目的:构建携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因的腺病毒表达载体并观测其在骨髓基质干细胞中的表达.方法:以pTG19T-VEGF121为模板利用PCR技术突变VEGF121基因以去除VEGF121基因中终止密码子,之后在基因序列前后分别加入NotⅠ和XhoⅠ酶切位点,并将得到的基因亚克隆至pMD19-T质粒上,双酶切pMD19-T-VEGF121和pShuttle-CMV-IRES- hrGFP-1质粒,凝胶回收小片段和大片段,后进行连接反应,完成穿梭质粒的构建.重组病毒物理滴度测定后感染骨髓基质干细胞,在荧光显微镜下观察荧光强度.结果与结论:经酶切鉴定及基因测序证实重组腺病毒质粒构建成功, 荧光显微镜下观察表明, 感染重组腺病毒的骨髓基质干细胞有明显的绿色荧光表达.可见构建的携带VEGF121-FLAG和hrGFP-1基因的腺病毒表达载体可在真核细胞表达, 有可能用于缺血性疾患的基因治疗.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘丹平	辽宁医学院附属第一医院关节外科	61	259	9.0	13.0
2	李谌	辽宁医学院附属第一医院关节外科	22	51	4.0	6.0
3	王国贤	辽宁医学院药理学教研室	44	198	8.0	10.0
4	胡亮	辽宁医学院附属第一医院关节外科	5	11	2.0	3.0