构建原代分离培养与鉴定小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞的方法及模型

• 作者: 丁明 汤艳 郑金旭 黄振杰
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 小鼠 肺泡Ⅱ型上皮细胞 原代培养 分离 鉴定 心肺组织工程
• 年，卷（期）: 2010,（15）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 2761-2764
• 分类号: R318
• 字数: 5489字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2010.15.024

摘要

背景:肺泡Ⅱ型上皮细胞在肺发育和肺功能调节中起重要作用,它与肺纤维化和肺癌等疾病的发生发展有密切联系,为了对这些疾病进行体外实验研究,必须对肺泡Ⅱ型上皮细胞进行分离、原代培养与鉴定以建立一个稳定高效的细胞模型.目的:建立一套可靠的小鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞分离、纯化、原代培养与鉴定的方法,为肺纤维化及肺癌等疾病的进一步研究奠定基础.方法:①用低浓度胰酶联合Ⅰ型胶原酶消化法,分离小鼠肺组织细胞成分.取出小鼠肺组织,剪成小块,加入胰蛋白酶,移出细胞悬液,加入含胎牛血清的DMEM中止消化;同法用胰蛋白酶再消化1次,中止消化后加入Ⅰ型胶原酶,再中止消化.②经差速离心差速贴壁和免疫黏附法纯化肺泡Ⅱ型上皮细胞,进行原代培养.将肺细胞悬液接种入包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出含未黏附细胞的液体接种于另一包被小鼠IgG的培养皿中培养,吸出未黏附细胞,去上清,重悬沉淀,将细胞接种于培养皿和培养板中培养.倒置显微镜观察细胞形态及生长特点,测定肺泡Ⅱ型上皮细胞产量、纯度及活力,免疫细胞化学染色鉴定肺泡表面活性蛋白A和肺泡表面活性蛋白C的表达,透射电镜鉴定肺泡Ⅱ型上皮细胞特异性细胞结构.结果与结论:用此方法,每只小鼠获得肺泡Ⅱ型上皮细胞(4.8±1.2)×10~6,纯度达到(85.0±2.4)%,细胞活力为(92.0±2.4)%,倒置显微镜下原代肺泡Ⅱ型上皮细胞呈圆形或立方形,细胞质内有大量反差明显的细小颗粒,细胞为岛状生长方式;免疫细胞化学鉴定,肺泡表面活性蛋白A呈棕黄色,肺泡表面活性蛋白C呈绿色,均定位表达于细胞浆;透射电镜见特征性板层小体和细胞游离面大量微绒毛.证实利用胰酶联合胶原酶消化,差速离心差速贴壁和免疫黏附纯化的方法可获得高产量高纯度的AEC Ⅱ,能满足一般的体外实验要求.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	郑金旭	江苏大学附属医院呼吸科	86	437	10.0	16.0
2	丁明	江苏大学附属医院呼吸科	28	141	7.0	10.0
3	汤艳	江苏大学附属医院呼吸科	11	114	6.0	10.0
4	黄振杰	江苏大学附属医院呼吸科	7	63	3.0	7.0