带有HA标签的HBc蛋白真核表达质粒的构建及其在HEK293细胞中的表达

• 作者: 张淑杰 张银 汤华 王芳 章广玲 袁丽杰
• 来源期刊: 山东医药
• 学科: 生物学
• 关键词: 质粒 乙肝病毒核心蛋白 基因 表达
• 年，卷（期）: 2010,（7）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 38-39
• 页数: 2页
• 分类号: Q782
• 字数: 1939字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-266X.2010.07.014

摘要

目的 构建带有流感病毒血凝素9钛表位标签(HA标签)的乙型肝炎病毒(HBV)核心蛋白(HBc)的表达质粒,为进一步研究HBc蛋白基因的功能奠定实验基础.方法 设计并合成扩增HBc蛋白全长的PCR引物,以野生型的HBV质粒pDolTHBV-1为模板,PCR扩增全长的HBc蛋白,大小为563 bp;PCR产物经过EcoRI和XholI酶切后,与线性化的pcDNA3/HA载体连接后转化大肠杆菌,扩增、纯化获得所需质粒,以琼脂糖凝胶电泳、酶切鉴定以及基因测序鉴定其分子质量和插入片段的序列;构建的质粒转染HEK293细胞48 h后,RIPA裂解细胞,Western blot检测HBc蛋白表达.结果 纯化质粒的相对分子质量为5.9 kb,酶切鉴定结果符合目的条带(563 bp)大小,插入的寡核苷酸序列与野生型HBV基因序列完全相符,表达的融合蛋白大小为28 kDa.结论 成功构建了带有HA标签的HBc蛋白的真核表达质粒pcDNA3/HA-HBc蛋白, 为进一步研究HBc蛋白的功能奠定了良好的实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	章广玲	华北煤炭医学院生物科学系	20	78	5.0	8.0
2	张淑杰	华北煤炭医学院生物科学系	26	266	8.0	16.0
3	汤华	天津医科大学天津市生命科学中心实验室	69	351	10.0	15.0
4	张银	天津医科大学天津市生命科学中心实验室	8	34	3.0	5.0
5	王芳	天津医科大学天津市生命科学中心实验室	41	112	6.0	7.0
6	袁丽杰	华北煤炭医学院生物科学系	15	82	6.0	8.0