优化反向PCR法分离转基因油菜外源T-DNA侧翼序列的研究

• 作者: 吴学龙 朗春秀 杨坤 陈锦清
• 来源期刊: 安徽农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 反向PCR 侧翼序列 改良CTAB法 转基因油菜
• 年，卷（期）: 2010,（10）
• 所属期刊栏目: 农业生物技术
• 页码范围: 5002-5005
• 分类号: S565.4
• 字数: 3545字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.0517-6611.2010.10.012

摘要

[目的]优化反向PCR(IPCR)条件分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列.[方法]以单拷贝的转基因油菜FS4为研究材料,用改良CTAB法提取转基因油菜总DNA,并进行酶切、纯化、自连接,再通过两轮巢式PCR扩增,进行序列对比.[结果]两轮巢式PCR扩增得到1个大小为4.0 kb的片段,其序列与油菜数据库中BH652424和BZ044084两序列同源性分别高达97.8%和63.4%.根据序列比对结果设计特异引物对进行PCR验证的结果,也证明了FS4转基因油菜中T-DNA的确插入在该位点.[结论]优化后的IPCR条件能成功分离油菜转基因外源T-DNA的侧翼序列.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨坤	浙江师范大学化学与生命科学学院	3	21	3.0	3.0
5	吴学龙	浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物基因工程代谢重点实验室	9	39	4.0	6.0
6	朗春秀	浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物基因工程代谢重点实验室	4	23	3.0	4.0
7	陈锦清	浙江省农业科学院病毒学与生物技术研究所浙江省植物基因工程代谢重点实验室	40	720	13.0	26.0