不同DNA抽提方法对普通PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫的影响

• 作者: 何永强 吴姗 帅江冰 张晓峰 徐国群 李光才 王素华 董强 邱海洪 鲁兴萌
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 家蚕微孢子虫 DNA抽提方法 PCR 荧光定量PCR 家蚕微粒子病 检疫
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 1329-1334
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

为了优选快速、灵敏、特异的家蚕微孢子虫Nosema bombycis分子检测方法和DNA抽提力法,本文通过对家蚕微孢子虫TaqMan探针荧光定量PCR检测方法和SYBR Green荧光定量PCR检测方法的建立以及反应体系优化,并与普通PCR方法进行比较；再采用4种不同DNA抽提方法分别对PCR和实时荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫悬浮液的效果评价.结果显示:不经过DNA抽提,直接将家蚕微孢子虫发芽液进行PCR反应的效果优于其他方法,检测灵敏度由高到低依次为直接法、酚/氯仿抽提法、动物组织DNA试剂盒抽提法和植物组织DNA试剂盒抽提法；TaqMan探针法检测家蚕微孢子虫发芽液的灵敏度和SYBR Green法相近,达到微孢子102个/mL,两者均优于普通PCR方法.实验表明,直接采用发芽液结合荧光定量PCR方法检测家蚕微孢子虫最为简便、快速、灵敏.该研究结果将有助于提高家蚕微粒子病监控技术和检疫能力,对家蚕微粒子病的检疫和防治具有积极意义.