结核杆菌DnaA蛋白的原核表达及免疫血清的制备和检测

• 作者: 吴晓康 周爱萍 徐纪茹 段艳 王娟 韩蕾
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 结核分枝杆菌 DnaA蛋白 DNA复制起始 原核表达
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 50-53,88
• 分类号: R378.91
• 语种: 中文

摘要

目的 在大肠杆菌中表达重组结核杆菌DnaA蛋白,对表达产物进行纯化、鉴定后制备DnaA蛋白特异性免疫血清并进行Western blot检测.方法 以结核分枝杆菌标准菌株H37Rv基因组为模板,PCR扩增DnaA基因,构建DnaA原核表达质粒pET-DnaA,转化表达宿主大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导重组蛋白表达,非变性条件下镍琼脂糖凝胶亲和层析纯化重组蛋白pET-DnaA,并用Western blot检测和鉴定重组蛋白,用纯化得到的重组蛋白制备特异性免疫血清.结果 成功构建了结核杆菌pET-DnaA重组质粒,并在大肠杆菌中得到高效表达;用分离纯化后的重组蛋白免疫动物,获得高效价的特异性免疫血清.结论 结核杆菌DnaA蛋白及其特异性抗体的成功制备,为进一步研究该蛋白在结核菌DNA复制机制中的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王娟	西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系	165	750	14.0	21.0
2	吴晓康	西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系	20	67	5.0	7.0
3	段艳		7	43	4.0	6.0
4	徐纪茹	西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系	24	73	4.0	6.0
5	韩蕾	西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系	15	63	5.0	7.0
6	周爱萍	西安交通大学医学院免疫学与病原生物学系	3	8	2.0	2.0