表达绿色荧光蛋白的重组鸡传染性支气管炎病毒的构建

• 作者: 刘梅 吕晓娟 周生 唐梦君 戴亚斌 程旭 赵宝华
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 农学
• 关键词: 传染性支气管炎病毒 绿色荧光蛋白 重组病毒 病毒拯救
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-17
• 页数: 7页
• 分类号: S852.65+9.6
• 语种: 中文

摘要

为探讨鸡传染性支气管炎病毒(IBV)作为载体表达外源基因的可行性,本研究根据IBV H120疫苗株的全基因组序列设计引物,采用RT-PCR方法分10个片段对其基因组进行扩增.并克隆至pMD19-T载体中;同时构建IBV基因组5a基因编码区被增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因替换的重组质粒.采用体外拼接策略,将Bsa Ⅰ酶切处理的10个基因片段顺序连接,构建5a基因编码区被EGFP基因替换的基因组全长cDNA,其5'端具有完整的T7 RNA聚合酶启动子核心序列,3'端具有polyA尾巴结构.然后通过T7 RNA聚合酶体外转录系统合成病毒基因组RNA.脂质体转染BHK-21细胞进行病毒拯救.结果表明成功的从基因组全长cDNA拯救出重组病毒H120-5a/EGFP株,其在鸡胚中能有效的复制和传代,并表达绿色荧光蛋白;5a基因的缺失并不影响病毒对鸡胚的致病性.本研究为进一步开展IBV的分子致病机理、载体疫苗等研究奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐梦君	中国农业科学院家禽研究所	21	160	8.0	12.0
2	戴亚斌	中国农业科学院家禽研究所	39	228	9.0	13.0
3	吕晓娟	中国农业科学院家禽研究所	17	97	5.0	9.0
4	周生	中国农业科学院家禽研究所	17	80	6.0	8.0
5	刘梅	中国农业科学院家禽研究所	37	187	8.0	11.0
6	程旭	中国农业科学院家禽研究所	25	89	6.0	9.0
7	赵宝华	中国农业科学院家禽研究所	26	113	5.0	10.0