体细胞核移植生产绵羊转hALR基因囊胚

• 作者: 任宇 刘东军 周雪原 旭日干 马玉珍
• 来源期刊: 动物学研究
• 学科: 农学
• 关键词: 绵羊 转基因 体细胞 核移植
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 617-623
• 分类号: Q813|S826.2|Q291
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1141.2011.06617

摘要

扩增人肝细胞再生增强因子(human augmenter of liver regeneration,ALR)基因,利用质粒pIRES2-EGFP 构建新霉素(Neo)、增强绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescence protein,EGFP)双标记基因且EGFP和ALR基因为双顺反子的真核表达载体.LipofectAMINETM介导其转染体外培养的绵羊胎儿成纤维细胞(sheep fetal fibroblast cells,sFFCs);经G418筛选转基因细胞；激光共聚焦显微镜挑选绿色荧光单克隆细胞.PCR、RT-PCR和免疫组织化学方法进一步检测ALR基因及其表达；稳定表达外源基因的sFFCs作供体,移入去核的绵羊卵母细胞中,进行体细胞核移植.通过激光共聚焦显微镜和ALR抗体检测EGFP、ALR基因在胚胎水平上的表达,其结果表明:由IRES连接的EGFP和ALR基因可在绵羊胎儿成纤维细胞内同时表达,由此细胞核移植产生的转基因胚胎在发育的各阶段均可见绿色荧光；囊胚中所有细胞表达EGFP基因；发绿色荧光的胚胎中ALR基因同时存在.因此,由IRES连接标记基因和目的基因,以标记基因指示目的基因的表达,可简化检测目的基因的繁琐手段；用筛选的转基因早期胚胎进行移植,可提高制备转基因动物的效率.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	旭日干	内蒙古大学哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室	81	786	15.0	24.0
2	刘东军	内蒙古大学哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室	41	198	9.0	12.0
3	马玉珍		46	122	6.0	9.0
7	任宇	内蒙古大学哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室	6	29	3.0	5.0
8	周雪原	内蒙古大学哺乳动物繁殖生物学与生物技术教育部重点实验室	2	10	1.0	2.0