灰飞虱高带毒(RSV)群体酵母双杂交cDNA文库的构建

• 作者: 周益军 孙丽娟 徐秋芳 李硕 李醒 熊如意
• 来源期刊: 昆虫学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 灰飞虱 水稻条纹病毒 同源重组 cDNA文库 酵母双杂交cDNA文库
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 简报
• 页码范围: 1324-1328
• 分类号: Q966
• 语种: 中文

摘要

为了研究灰飞虱Laodelphax striatellus Fallén与水稻条纹病毒(rice stripe virus,RSV)互作机制,本研究构建了灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库.以实验室筛选的灰飞虱高带毒群体为材料,分离纯化mRNA,反转录合成双链cDNA,并连接三框型接头,层析柱分级纯化.采用同源重组反应制备三框型cDNA入门文库,再通过同源重组将入门文库转移剑Gateway兼容载体pGADT7-DEST上,构建获得酵母双杂交cDNA文库.检测结果表明:文库库容量为3.68×107 cfu,扩增文库滴度为2.62×101o cfu/mL；文库重组率大于95％,cDNA插入片段平均长度＞1 kb,达到了标准cDNA文库的要求.灰飞虱高带毒群体酵母双杂交cDNA文库的构建为开展昆虫介体与水稻条纹病毒瓦作机制的研究奠定了基础.