免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞的应用研究

• 作者: 刘怀普 卢聪 吴若彬 朱小兰 朱平 沈二霞 王巍 谢波 麦明杰 黄克力 黄晶晶
• 来源期刊: 器官移植
• 学科: 医学
• 关键词: 免疫磁珠两步法 CD4+CD25+调节性T细胞 流式细胞术 小鼠
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 354-357
• 分类号: R4
• 字数: 2695字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7445.2011.06.015

摘要

目的 研究免疫磁珠两步法体外分离纯化小鼠脾脏CD4+CD25+调节性T细胞(regulatory T cells,Treg)的效果.方法 将C57BL/6(H-2b)小鼠脾脏剪碎、过滤、去除红细胞后离心洗涤,获得小鼠脾细胞悬液.用Ficoll法分离获得单个核细胞后,通过免疫磁珠阴性加阳性选择两步法分离获得CD4+CD25+Treg和CD4+CD25-Treg.用流式细胞仪检测所获得CD4+CD25+Treg的纯度,并比较纯化分离前后脾脏CD4+CD25+Treg的比例,用台盼蓝染色后计算CD4+CD25+Treg的细胞存活率,并对分离后的细胞表型进行鉴定.结果 免疫磁珠阴性加阳性选择两步法纯化分离后CD4+CD25+Treg的纯度为(88.7±2.9)%,分离前CD4+CD25+Treg的平均比例为11.6 %,纯化分离后CD4+CD25+Treg的平均比例为93.7 %.细胞存活率为(93.7±4.1)%.与CD4+CD25-Treg相比,CD4+CD25+Treg的CD44表达略有增加(P>0.05),CD45RB的表达明显下降(P＜0.05),CTLA- 4和Foxp3的表达明显增加(均为P＜0.05).结论 使用免疫磁珠两步法分离纯化,能避免激惹CD4分子,可获得高纯度且具有天然CD4+CD25+Treg表型的细胞.