DC-SIGN胞外区基因的克隆、蛋白表达及抗体制备

• 作者: 刘朝奇 吕佰瑞
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: DC-SIGN 蛋白表达 多克隆抗体 Western blotting 免疫荧光
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 187-191
• 分类号: Q3
• 字数: 3323字
• 语种: 中文

摘要

旨在构建DC-SIGN胞外区基因原核表达质粒,诱导蛋白表达并制备多克隆抗体.用PCR的方法扩增编码DC-SIGN胞外区的基因序列,将其克隆到原核表达载体pET-28a(+)中,利用大肠杆菌表达系统表达DC-SIGN胞外区蛋白,用His抗体做Western Blotting鉴定目的蛋白的免疫原性.用纯化的DC-SIGN胞外区蛋白免疫日本大耳白兔,制备多克隆抗体.通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗体效价,免疫荧光法检测其特异性.结果显示,原核表达载体pET-28a(+)-DC-SIGN胞外区基因成功构建,可在大肠杆菌BL21(DE3)中高效表达,获得相对分子质量约20kD的DC-SIGN胞外区蛋白,经Westernblotting鉴定为正确.纯化后的蛋白免疫大耳白兔,制备的多克隆抗体具有较强免疫原性和特异性.本研究得到了纯化的DC-SIGN胞外区蛋白,并制备了具有特异性和高效价的抗体,为研究DC-SIGN生物学功能提供试验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘朝奇	三峡大学分子生物学研究所	171	552	10.0	15.0
2	吕佰瑞	三峡大学分子生物学研究所	14	30	3.0	5.0