胚胎大鼠背根神经节酶消化法的评价

• 作者: 张伟 王士杰 王鸿 矫健 雷雳 黄丽辉
• 来源期刊: 中国耳鼻咽喉头颈外科
• 学科: 医学
• 关键词: 动物实验 大鼠 神经节,脊 细胞培养
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 207-211
• 分类号: R764
• 字数: 3219字
• 语种: 中文

摘要

目的 为胚胎大鼠背根神经节(dorsal root ganglion,DRG)神经元耳蜗植入建立优化的体外分离培养方法.方法 ①比较3种组合酶消化法对胚胎大鼠DRG神经细胞的分散度以及神经细胞存活时间的差异.实验组:木瓜蛋白酶、胶原酶Ⅱ/胰蛋白酶、DNA酶Ⅰ;对照组Ⅰ∶木瓜蛋白酶、胶原酶Ⅱ/中性蛋白酶Ⅱ、DNA酶Ⅰ;对照组Ⅱ∶胶原酶Ⅱ、胰蛋白酶.②通过激光共聚焦显微镜观察体外培养神经元神经烯醇化酶(neuronal specific enolase,NSE)、高分子量神经微丝(neurofilament H,NF-H)的表达,比较不同酶消化法对神经元轴突长度的影响.结果 DRG神经细胞分散度分别为:实验组80%～90%,对照组Ⅰ60%～70%,对照组Ⅱ 30%～40%;神经细胞存活时间:实验组(12.0±3.0)d,对照组Ⅰ(7.5±1.5)d,对照组Ⅱ(4.5±0.5)d.3种组合酶处理的神经元均有NSE和NF-H阳性表达,实验组轴突长度在培养第3、5、7天均明显长于另外两组,差异有统计学意义(F分别为32.612、6.093、9.334,P均＜0.05),神经元轴突长度测量:实验组＞对照组Ⅰ＞对照组Ⅱ.结论 木瓜蛋白酶、胶原酶Ⅱ/胰蛋白酶、DNA酶Ⅰ组合消化法对胚胎大鼠DRG神经细胞体外分离最为理想,可为基因修饰神经元耳蜗植入的实验提供大量的、存活时间长且活性好的细胞来源.