带有穿膜肽PTD的重组Oct4的制备及活性鉴定

• 作者: 余榕捷 刘晓飞 李晓霞 李红阳 王静静 苏航 陈建苏
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: Oct4 诱导全能干细胞
• 年，卷（期）: 2011,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1790-1795
• 分类号: Q78
• 字数: 5245字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4718.2011.09.025

摘要

目的:重组蛋白构建细胞转录因子PTD-Oct4.方法:利用重叠延伸PCR法重组目的基因构建质粒pKYB-PTD-Oct4,并转染至E.coli ER2566.镍柱纯化重组蛋白并用Western bloting对其进行鉴定.用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PTD-Oct4,检测其穿透中国仓鼠卵巢(CHO)细胞膜的能力;用荧光共振能量转移(FRET)检测重组融合蛋白PTD-Oct4结合目的DNA的活性.结果:成功获得目的蛋白PTD-Oct4,其可以成功进入细胞,定位于细胞核内,穿膜效率为(28.3±2.4)%,并具有与目标DNA序列特异结合的能力.结论:制备重组PTD-Oct4为外源蛋白诱导多能干细胞(IPSCs)奠定基础.