基于颜色判定的环介导等温扩增技术检测HPV6和HPV16

• 作者: 杨梦婕 王淼 罗乐 聂凯 芦春斌 马学军
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 等温扩增 人乳头瘤病毒(HPV)
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 64-70
• 页数: 7页
• 分类号: R373.1|R446
• 语种: 中文

摘要

建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的检测方法,即环介导等温核酸扩增技术(LAMP)应用于HPV6和HPV16亚型的检测.该技术设计分别对应于HPV6和16的E6和E7基因序列中6个区段的4条特异引物,在等温条件下(63℃)进行核酸扩增反应1h,在扩增前加入HNB染料(羟基萘酚蓝)作为反应指示剂,以HNB染料颜色的变化做为结果判定的标准,并经LA-320实时浊度仪和琼脂糖电泳证实.文中利用这种技术对13份已知的单重感染13种HPV不同亚型的临床样本进行了特异性分析,同时对2个含目的片段的克降质粒的系列稀释物进行了灵敏度分析.结果显示LAMP方法特异性高,颜色法判断的灵敏度均为1000个拷贝DNA分子水平.比Real-time PCR低10～20倍,对62份宫颈刮片临床标本的HPV6和HPV16检出率和HPV分型试剂盒一致.因此,基于颜色判定的环介导等温扩增方法有望应用于人乳头瘤病毒HPV6和HPV16感染的快速筛选,具有在基层疾病预防控制中心和医院推广和应用的潜力.