草鱼呼肠孤病毒VP7基因核酸疫苗的构建及免疫效果

• 作者: 倪金俤 刘林 徐诗英 曹广力 李婧慧 杨鸢劼 薛仁宇 贡成良 邹勇 陈辉
• 来源期刊: 水产学报
• 学科: 农学
• 关键词: 草鱼呼肠孤病毒 VP7 核酸疫苗 β-肌动蛋白启动子
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 页码范围: 1694-1700
• 分类号: Q753|S917.4
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1231.2011.17543

摘要

将草鱼呼肠孤病毒( GCRV)外衣壳蛋白VP7双基因(约0.9 kb)及团头鲂的β-肌动蛋白启动子(约0.56 kp)经扩增并鉴定正确后,克隆至基因转移载体pFastBacTM Dual中,获得重组质粒pFastBac-β-VP71 -VP72,以此研究草鱼免疫实验及免疫效果.重组质粒按10、30、60μg分为3组,同时设30 μg空载体组及对照组.于免疫后第14、21、28、49天通过RT-PCR检测VP7的转录水平、间接凝集反应测定抗体水平及攻毒试验检测免疫保护效果.结果显示,pFastBac-β-VP71 -VP72导入鱼体后,VP7基因在β-肌动蛋白启动子的驱动下持续表达,至第49天仍能检测到目的基因的转录；各免疫组均有抗体产生,抗体效价在免疫后第21天达到最高,攻毒后10、30、60 μg核酸疫苗免疫组死亡率分别为0％、0％、5％,而空载体组和对照组分别为30％和100％,表明pFastBac-β-VP71-VP72作为核酸疫苗对草鱼病毒性出血病有较好的免疫保护效果.研究结果为草鱼呼肠孤病毒核酸疫苗的研发与生产应用奠定了基础.