猪GM-CSF基因的克隆及其真核表达载体的构建

• 作者: 任远 占才耀 向敏 夏瑜 王连芳 邵淑敏 钱运国 陈志华 陶弼菲 高其双 黄海军 黄远全
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子 克隆 真核表达载体 瞬时转染
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 112-115,132
• 分类号: Q78
• 字数: 3338字
• 语种: 中文

摘要

采用PCR方法从猪外周血液淋巴细胞cDNA中扩增出与预期设计大小相符的GM-CSF基因特异性条带,PCR产物经EcoR Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后,插入到载体pIRES2-EGFP构建成真核表达载体pIRES2-EGFP-GM-CSF.经PCR鉴定、限制性内切酶酶切分析和克隆片段序列测定、比较,证实了重组质粒的正确性.将构建好的真核表达质粒转染到山羊胎儿成纤维细胞中进行瞬时表达,荧光检测证实细胞转染成功.pIRES2-EGFP-pGM-CSF真核表达载体的成功构建为下一步在细胞水平研究GM-CSF蛋白功能以及进一步将其开发为高档疫苗佐方剂奠定了基础.