水牛CD14 cDNA的克隆、表达及鉴定

• 作者: 刘涛 崔森 张冬琳 成鹰 杜丽 王凤阳 莫蘼 陈兴生 陈品林 雷明
• 来源期刊: 生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 水牛 CD14 克隆 表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 28-32
• 分类号: Q786
• 字数: 3814字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-311X.2011.01.010

摘要

目的:克隆水牛白细胞分化抗原14(buffalo cluster of differentiation antigen14,bCD14)基因,表达bCD14蛋白,并进行Western Blot鉴定.方法:采用RT-PCR方法从水牛外周血白细胞中扩增bCD14基因,构建重组质粒pET28a-bCD14,转化入E coli BL21,IPTG诱导表达,对表达蛋白进行可溶性分析及Western blot鉴定.结果:bCD14基因含有一个1 122bp的开放阅读框,编码373个氨基酸;与印度水牛、挪威大鼠和人CD14的cDNA序列同源性分别为97.95%、68.78%、78.60%,氨基酸同源性分别为96.78%、61.27%、72.34%;主要以包涵体形式表达,表达蛋白经Western Blot鉴定,得到了一条约46 kD的特异性条带.结论:该文成功克隆了bCD14基因,表达了bCD14蛋白,为进一步揭示水牛抵抗革兰氏阴性菌感染的免疫机制奠定了基础.