人胰高血糖素样肽-2类似物基因串联体构建及原核细胞表达

• 作者: 刘景晶 刘涛 周哲 庄舰峰 张美由 李泰明 谷春娇 马艳红
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 人胰高血糖素样肽-2类似物 串联体 同尾酶
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 100-105
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文

摘要

利用同尾酶法构建人胰高血糖素样肽一2类似物{PP-h[Gly2]GLP-2(1-35)}基因串联体重组质粒,实现目的基顺在大肠杆菌中高效表达.通过PCR扩增获得pp-h[Gly2]GLP-2(1-35)基因片段,利用同尾酶BamHI和BclⅠ产生相同的粘性末端,经连接、转化、筛选等操作构建其基因串联体.经DNA测序分析,成功构建PP-h[Gly2]GLP-2(1-35)的二、四、六、八拷贝基因串联体.SDS-PAGE显示.各重组菌经D-乳糖诱导后均表达目的融合蛋白,其相对分子质量与预期结果相符,目的肽含量并非随串联个数增加而明显增加,改变融合伙伴后,目的肽的表达量从0.106 g/L提高到0.372 g/L,为大量制备和纯化pp-h[Gly2]GLP-2(1-35)奠定了基础.