鸡胚成纤维细胞酵母双杂交cDNA文库的构建及鉴定

• 作者: 刘秀梵 开妍 朱艳梅 段志强 王晓泉 王郁杨 胡顺林
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 生物学
• 关键词: 新城疫病毒 鸡胚成纤维细胞 酵母双杂交 cDNA文库 SMART技术
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 页码范围: 1-2,5
• 分类号: Q785
• 字数: 1675字
• 语种: 中文

摘要

选取对新城疫病毒(NDV)易感的鸡胚成纤维细胞(CEF),Trizol提取细胞总RNA,用SMART技术合成双链cDNA,然后利用同源重组的方法在酵母细胞内构建CEF的cDNA文库,以寻找与NDV基质(M)蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,探讨其相互作用对NDV装配和出芽的影响.结果表明:提取的细胞总RNA的D260nm/D280nm为1.96,甲醛变性琼脂糖凝胶显示RNA未发生降解,质量良好.获得的文库容量为3×106 cfu,插入的双链cDNA片段大小为0.3～3 kb,平均长度为1.3 kb左右,文库重组率为100%.该文库的构建为发现和研究与NDV M蛋白相互作用的宿主细胞蛋白提供有效工具.