农杆菌介导转化大丽轮枝茵的体系优化

• 作者: 刘蔼民 张保龙 杨郁文 袁洪波 陈天子
• 来源期刊: 棉花学报
• 学科: 农学
• 关键词: 农杆菌 大丽轮枝菌 潮霉素 GFP 遗传转化 遗传稳定性 表型变异
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 研究与进展
• 页码范围: 507-514
• 分类号: S435.621
• 字数: 6080字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-7807.2011.06.004

摘要

为了揭示大丽轮枝菌的遗传变异和致病机理,以含潮霉素为抗性筛选标记、绿色荧光蛋白GFP为报告基因载体,优化了农杆菌介导转化大丽轮枝菌的遗传转化体系,获得了大丽轮枝菌菌株V991和BP2含绿色荧光蛋白GFP的转化子,转化率达到100×10-6～550×10-6.优化的转化条件为:农杆菌以IM液体培养基调节浓度至OD600=0.2并预培养4h,然后与等体积的浓度为106个·mL-1的大丽轮枝菌孢子混匀,每皿取200 μL混合液涂于固体IM共培养基的纤维素膜上,25℃共培养60h,转移至固体PDA培养基上以头孢噻肟钠500mg· LZ+潮霉素B 50 mg·L-1进行筛选.研究发现农杆菌LBA4404和AGL-1比农杆菌SK1044和EHA105更适用于大丽轮枝菌转化.对转化子观察和鉴定发现:从表型上,70.8％转化子保持野生型形态,29.2％转化子发生了形态变化；从致病力上,81％转化子的致病力相对于野生型没有发生显著变化,19％转化子的致病力或增强或减弱.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	张保龙	江苏省农业科学院江苏省农业生物学重点实验室	54	895	14.0	29.0
2	陈天子	江苏省农业科学院江苏省农业生物学重点实验室	13	75	5.0	8.0
3	杨郁文	江苏省农业科学院江苏省农业生物学重点实验室	29	232	10.0	14.0
4	刘蔼民	江苏省农业科学院江苏省农业生物学重点实验室	21	281	9.0	16.0
5	袁洪波	江苏省农业科学院江苏省农业生物学重点实验室	2	29	2.0	2.0