小麦亚硝酸还原酶基因及调控序列克隆、定位和表达分析

• 作者: 佘茂云 冯晨 叶兴国 杜丽璞 陈朵朵
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 小麦 亚硝酸还原酶 表达分析 启动子 染色体定位
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
• 页码范围: 28-39
• 分类号: S5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.00028

摘要

利用in silico及反向PCR技术,从小麦中克隆了亚硝酸还原酶编码基因及其调控序列,进一步利用原核诱导表达、半定量RT-PCR、AS-PCR及生物信息学手段对克隆的新基因进行鉴定及染色体定位分析.开放阅读框预测结合测序结果表明,该基因gDNA长2 881 bp,包含4个外显子和3个内含子,cDNA长1 830 bp,GenBank登录号分别为FJ555239和FJ527909,预测编码产物大小约为65.7 kD,与NCBI已公布的亚硝酸还原酶基因编码产物同源性达60%以上,其中与其他单子叶谷类作物同源性达80%以上.IPCR技术延伸该基因5'端侧翼序列至-2 924 bp(以ATG起始计算),经1 mmol L<'-1>IPTG诱导后可表达大小约为70 kD的蛋白(含约3.8 kD的组氨酸标签).RT-PCR结果显示,30 mmol L<'-1>KNO<,3>处理小麦幼苗1 h,亚硝酸还原酶基因表达量最高.酶活性测定表明,随着KNO<,3>处理时间延长亚硝酸还原酶活性增强.AS-PCR检测发现,该基因在普通小麦6A及6B染色体上至少各存在1个拷贝.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈朵朵	武汉大学生命科学学院	2	16	2.0	2.0
2	冯晨		1	11	1.0	1.0