实时定量聚合酶链反应检测前列腺癌抗原3方法的建立

• 作者: 姚旭东 张世林 张海梁 戴波 施国海 曹达龙 朱一平 朱耀 沈益君 马春光
• 来源期刊: 上海医学
• 关键词: 前列腺癌 前列腺癌抗原3 SYBR Green 实时荧光定量聚合酶链反应
• 年，卷（期）: 2011,（7）
• 所属期刊栏目: 专题研究
• 页码范围: 521-524
• 分类号: R737.25
• 语种: 中文

摘要

目的 建立检测前列腺癌抗原3(PCA3)基因的实时定量聚合酶链反应(PCR)方法.方法 应用反转录-PCR扩增PCA3后,通过琼脂糖凝胶电泳和基因测序进行鉴定.应用SYBR Green实时荧光定量PCR检测PCA3和建立相应的标准曲线,使用熔解曲线分析扩增产物的特异性.同时在临床标本中验证所建立的PCA3检测方法的效能.结果 琼脂糖凝胶电泳和基因测序均提示扩增产物是特异性的.建立的检测PCA3的SYBR Green实时荧光定量PCR方法的线性检测范围为1×101～1×10-7拷贝,扩增效率为98％,决定系数为0.999.熔解曲线仅见单一的峰,证实扩增产物是特异性的.该方法的日内和日间变异系数分别为2.1％和2.7％.利用所建立的PCA3检测方法分析86例前列腺癌患者和45例非前列腺癌患者尿液中的PCA3表达水平,结果表明PCA3早期诊断前列腺癌的性能显著优于血清前列腺特异性抗原(PSA).结论 建立了一种快速、灵敏、高特异性、宽定量范围和高重复性检测PCA3的实时定量PCR方法.