海南坡鹿CDC42 cDNA的克隆、原核表达及纯化

• 作者: 刘涛 张冬琳 张巍 成鹰 曹献英 杜丽 王凤阳 祁超 符运南 许世英 陈品林 陈欢 雷明
• 来源期刊: 兽类学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 海南坡鹿 CDC42 克隆 原核表达 纯化
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 97-102
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

应用RT-PCR方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42(Cell division cycle 42,CDC42)编码区进行扩增,将扩增产物与PET-42a载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pET42a-hdCDc42表达载体,经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE、可溶性分析、纯化及Western blot分析.结果表明,海南坡鹿CDC42含有1个576 bp的开放阅读框,编码191个氨基酸.经IPTG诱导表达后,得到一个带有His-tag和GST的约54 kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约54 kD的特异性抗体结合带,表明海南坡鹿CDC42原核表达载体成功构建并表达.