携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0的构建

• 作者: 田玉科 陈敏 项红兵
• 来源期刊: 肿瘤学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: DREAM 重组腺相关病毒 包装质粒 RNA干扰
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 30-33
• 分类号: R730.23
• 语种: 中文

摘要

[目的]构建携带DREAM基因小分子干扰RNA(siRNA)的腺相关病毒载体包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,为进一步研究DREAM基因在癌痛基因治疗中的作用奠定基础.[方法]设计并合成包含DREAM短发夹序列(shRNA)两条互补的寡核昔酸链,退火后插入到经过EcoR Ⅰ和SalⅠ双酶切的pDC316-EGFP-U6质粒的EcoR Ⅰ和SalⅠ位点,得到重组质粒pDC316-EGFP-DREAMshRNA-U6,然后以其为模板,通过PCR扩增DREAMshRNA-ECFP片段,并引入EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ位点,PCR产物与pSANV2.0经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ酶切后连接得到重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP,转化入感受态大肠杆菌DH-5α,获得阳性克隆进行 PCR、酶切和测序鉴定.[结果]PCR、酶切鉴定以及测序结果证实,插入的片段序列和位点完全正确,重组质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP的构建成功.[结论]成功构建携带DREAM基因小分子干扰RNA重组腺相关病毒包装质粒pSANV2.0-DREAMshRNA-EGFP.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈敏		290	2590	26.0	39.0
2	田玉科		218	1564	18.0	31.0
3	项红兵		6	16	2.0	4.0