人溶菌酶-木聚糖酶融合基因在毕赤酵母中的表达

• 作者: 唐存多 邬敏辰 高金湖
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 胞壁质酶 木聚糖酶 重组融合蛋白质类 生物活性
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 297-301
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的 在毕赤酵母中表达人溶菌酶(Human lysozyme,hLY)-木聚糖酶(Xylanases,Xyn Ⅱ)融合基因.方法 通过PCR技术将hLY基因与Xyn Ⅱ基因连接,中间插人肠激酶识别位点序列;将其克隆至载体pPIC9K上,构建重组表达质粒pPIC9K-Xyn Ⅱ-EKsite-hLY,经Sac Ⅰ线性化后,电转化毕赤酵母GS115,通过G418抗性筛选得到高拷贝转化子,PCH鉴定为阳性的克隆用甲醉进行诱导;表达的融合蛋白经Sephadex G-75凝胶柱层析纯化后,用肠激酶酶切,分别采用改良舒加法和DNS法测定hLY和Xyn Ⅱ的活性.结果 获得的融合基因序列与理论序列完全一致;重组表达质粒构建正确;融合蛋白的hLY和Xyn Ⅱ活性分别为170和158 U/ml,经肠激酶酶切后,hLY的活性为520 U/ml,Xyn Ⅱ的活性达244 U/ml.结论 已在毕赤酵母中成功表达了Xyn Ⅱ-EKsite-hLY融合基因,经肠激酶酶切后的目的蛋白活性均有较大提高.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	邬敏辰	江南大学医药学院	163	1504	22.0	29.0
2	唐存多	江南大学医药学院	12	61	6.0	7.0
3	高金湖	江南大学医药学院	4	14	2.0	3.0