兔出血症病毒双夹心ELISA检测方法的建立

• 作者: 李洪广 熊富强 王先炜 王敏敏 王芳 胡波 范志宇 董婷
• 来源期刊: 江苏农业学报
• 学科: 农学
• 关键词: 兔出血症病毒 双夹心ELISA 多抗 单抗
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 畜牧兽医·水产养殖
• 页码范围: 571-576
• 分类号: S852.5+2
• 字数: 5465字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-4440.2011.03.019

摘要

为建立特异性好、敏感度高、稳定可靠的检测兔出血症病毒的双夹心ELISA方法。该试验制备了兔出血症病毒多抗和小鼠腹水单抗，并将他们提纯。用方阵法筛选最佳反应浓度，用特异性试验、敏感度试验和重复性试验对该方法进行鉴定，并同时用双夹心ELISA和血凝试验(HA)对52份待测兔肝脏样品进行检测，比较这两种方法的符合率。结果显示：兔出血症病毒多抗最佳稀释度为1：400，浓度为19.50 mg/L；单抗的最佳稀释度为1：800，浓度为2.86 mg/L。特异性试验和敏感性试验结果表明，该方法特异性强、敏感度高。对52份待检兔肝脏样品的检测结果显示：双夹心ELISA和HA试验的阳性检出率分别为82.7％(43/52)和75.0％(39/52)，双夹心ELISA与HA试验的符合率为90.7％。用不同批次包被的酶标板重复检测已知样品显示出良好的重复性。以上试验结果表明该双夹心ELISA方法是检测RHDV的一种特异、敏感、快速、经济的免疫学检测技术。