利用BSMV-VIGS技术快速分析小麦TNBL1基因的抗黄矮病功能

• 作者: 刘艳 张增艳 李宁 赵丹 赵继荣 黄占景 黄茜
• 来源期刊: 作物学报
• 关键词: 小麦 中间偃麦草 黄矮病 病毒诱导的基因沉默 NBS-LRR
• 年，卷（期）: 2011,（11）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 2106-2110
• 分类号: S512.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3724/SP.J.1006.2011.02106

摘要

小麦黄矮病是由蚜虫介导的大麦黄矮病毒(Barley yellow dwarf virus,BYDV)侵染引起的小麦重要病害之一.利用cDNA-AFLP分析,筛选出在抗黄矮病小麦易位系YW642中特异表达的长度为292 bp的cDNA片段,以此片段为启始序列,利用RACE和RT-PCR技术克隆出该基因的全长cDNA序列,推导该基因编码1个NBS-LRR蛋白,将其命名为TNBL1.本研究利用大麦条纹花叶病毒(BSMV)诱导的基因沉默(virus-inducing gene silencing,VIGS)技术,快速分析TNBL1是否参与小麦抗黄矮病反应.通过PCR添加酶切位点、定向酶切与连接,将TNBL1特异的292 bp片段反向整合到BSMV-γ链的多克隆位点上,获得重组载体BSMV-γ:TNBLlas,体外转录BSMV-VIGS载体的3个组分(BSMV- TNBLl as、BSMV-α和BSMV-β),等量混合、摩擦接种到抗黄矮病的小麦易位系YW642幼苗叶片上,使YW642中TNBL1基因沉默,然后接种BYDV病原进行黄矮病抗性鉴定.结果表明,TNBL1基因沉默后的YW642对BYDV敏感、显现感病症状,其体内BYDV含量较未发生基因沉默的YW642中的明显增加,证明TNBL1基因是正向调控小麦抗BYDV反应的1个重要基因.