胞质定位和核定位突触核蛋白慢病毒表达载体的构建

• 作者: 徐敏芳 赵康仁 钱进军 马瑞 高静
• 来源期刊: 江苏大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 人突触核蛋白 载体构建 慢病毒载体
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 基础医学
• 页码范围: 139-142,146,封3
• 分类号: R741
• 字数: 3434字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7783.2011.02.011

摘要

目的:构建表达人突触核蛋白(α-synuclein)核定位和胞质定位基因(SNCA-NLS和SNCA-NES)的真核细胞表达慢病毒载体,并且观察重组质粒在293FT细胞中的表达情况.方法:采用PCR 方法从质粒中扩增出目的基因,扩增出的目的基因与线性化后的载体PLVU-2A-EGFP在In-fusion重组酶作用下通过同源重组把目的片段连接到空载体上.目的片段和EGFP报告基因之间通过自剪切多肽2A 连接.对重组质粒进行PCR、双酶切和质粒测序鉴定后,采用阳离子脂质体Lipofectamine 2000 将重组的质粒转染至293FT细胞中,用荧光显微镜检测基因在细胞中表达的情况.通过蛋白质印迹分析核定位和胞质定位基因(SNCA-NLS和SNCA-NES)在胞核和胞质中突触核蛋白的定向表达.结果:PCR、双酶切和质粒测序结果证明SNCA-NLS和SNCA-NES已正确地克隆到真核表达载体PLVU-2A-EGFP中,并分别在细胞核和细胞质中定向表达.结论:成功构建了PLVU-SNCA-NLS-2A-EGFP及PLVU-SNCA-NES-2A-EGFP表达载体,为研究α-突触核蛋白在帕金森病发病过程中所起的作用奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	高静	江苏大学药学院	61	321	9.0	14.0
2	赵康仁	江苏大学第四附属医院神经内科	28	146	7.0	11.0
3	马瑞	江苏大学医学院	22	71	5.0	7.0
4	钱进军	江苏大学第四附属医院神经内科	20	138	6.0	11.0
5	徐敏芳	江苏大学药学院	2	1	1.0	1.0