APP695-siRNA慢病毒载体构建及其对SH-SY5Y细胞中APP695基因的沉默作用

• 作者: 崔月梅 巴庆华 张爱玲 温丽君 滕军放 赵莘瑜
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: siRNA 慢病毒载体 APP695基因
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 520-523
• 分类号: R346
• 字数: 1855字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2011.04.007

摘要

目的：构建针对APP6995的siRNA慢病毒载体，并检测其对人神经纤维母细胞瘤SH-SY5Y细胞株中APP695基因表达的沉默作用。方法：设计并合成针对筛选确定的APP695基因寡核苷酸序列特异性siRNA有效靶序列，同时合成1对阴性对照寡核苷酸序列，将以上寡核苷酸序列退火后连人pFU-GW-jRNA质粒，酶切和测序鉴定后，将它们分别与包装质粒混合物共感染293T细胞，产生具有感染能力的慢病毒颗粒，并感染SH-SY5Y细胞，分未经病毒感染(CON)组、阴性对照病毒感染(NC)组和慢病毒介导阳性干扰(APP695-RNAi)组；应用实时荧光定量PCR(FQ-RT-PCR)检测各组细胞APP695 mRNA的表达水平。结果：酶切和测序证实目的寡核苷酸片段已被准确克隆到pFU-GW-iRNA质粒；各质粒与包装质粒共感染293T细胞后收获慢病毒颗粒；感染SH-SY5Y细胞72 h后，不同组别APP695 mRNA表达水平不同(F=554.442，P＜0.001)，APP695-siRNA组表达水平低于CON组和NC组。结论：成功构建了APP695-siRNA慢病毒载体，该载体可有效沉默SH-SY5Y细胞中APP695 mRNA的表达。

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	赵莘瑜	郑州大学第一附属医院神经内科	59	230	8.0	11.0
2	滕军放	郑州大学第一附属医院神经内科	180	715	12.0	15.0
3	崔月梅	郑州人民医院神经内科	6	19	3.0	4.0
4	张爱玲	郑州人民医院神经内科	14	71	6.0	7.0
5	巴庆华	郑州人民医院神经内科	7	30	3.0	5.0
6	温丽君	郑州大学第一附属医院神经内科	5	31	3.0	5.0