微生物发酵床垫料微生物总DNA提取方法的研究

• 作者: 刘云浩 刘波 朱昌雄 蓝江林 郭萍 陈燕萍
• 来源期刊: 福建农业学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 垫料微生物 DNA提取 SDS-CTAB 16S rDNA
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生物技术
• 页码范围: 153-158
• 分类号: Q781
• 字数: 4056字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1008-0384.2011.02.003

摘要

传统的平板分离培养法,不能全面反映垫料微生物的基因信息,所以获得高质量的垫料微生物总DNA对于研究垫料微生物的群落结构就显得尤为重要.本实验设计对比了6种关于养猪发酵床垫料微生物总DNA的提取方法,对6种方法提取的DNA的浓度和纯度进行比较评价,结果表明,试剂盒法中因为没有专门针对本实验垫料的总DNA提取试剂盒,所采用的粪便,土壤以及淤泥总DNA提取试剂盒都没有达到很好的效果;而在化学法当中,单纯的SDS法和CTAB法都不能有效除去腐殖酸和杂蛋白的污染,通过核酸蛋白分析仪测定的A260/A280的比值基本都在1.5以下,说明纯度很低,用16S rDNA通用引物进行PCR扩增也没有得到目的条带.在SDS-CTAB结合法中利用10%的PEG-8000进行沉淀不进行回收纯化所提取的DNA具有完整性好,纯度高的优点,浓度达到200 ng·μL-1以上,通过核酸蛋白分析仪测定的A260/A280的比值达到1.8左右.用16S rDNA 通用引物扩增得到比较亮的目的条带,因此SDS-CTAB结合法是一种高效、可靠的垫料微生物总DNA提取方法,有利于进行下游的分子生态学研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘波	福建省农业科学院农业生物资源研究所	496	4446	29.0	44.0
2	蓝江林	福建省农业科学院农业生物资源研究所	78	905	17.0	25.0
3	朱昌雄	中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所	114	1385	20.0	33.0
4	郭萍	中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所	64	552	12.0	21.0
5	陈燕萍	福建省农业科学院农业生物资源研究所	22	115	6.0	9.0
6	刘云浩	中国农业科学院农业环境与可持续发展研究所	2	4	1.0	2.0