山羊类ES细胞的分离与培养

• 作者: 刘艳 蒋思文 邓兵 高其双 黄海军
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 胚胎干细胞 内细胞团 山羊
• 年，卷（期）: 2011,（8）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 1187-1192
• 分类号: S827
• 字数: 3822字
• 语种: 中文

摘要

旨在优化并建立有利于山羊类ES细胞生长的饲养层细胞、培养基、细胞因子和传代方法.本研究选择武汉市本地白山羊配种6～7 d后的胚胎,通过全胚培养法、酶消化与机械分离结合法分离山羊类ES细胞,并在不同的细胞饲养层中饲养、在培养基中添加不同的生长因子、采用不同的传代方法,比较不同培养条件对山羊类ES细胞生长和增殖的影响.通过碱性磷酸酶染色和免疫组化染色法鉴定ES细胞特异生物标记AKT、SSEA-1和Oct-4的表达,并将得到的山羊类ES细胞进行体外分化.结果表明,与小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse embryonic fibroblast,MEF)和山羊胎儿成纤维细胞(Goat embryonic fibroblast,GEF)相比,C2C12更有利于细胞的贴壁,但差异不显著(P＞0.05)；细胞传代时,在高浓度细胞因子LIF(Leukemia inhibitory factor)和SCF(Stem cell factor)中处理ICM(Inner cell mass),更有利于细胞传代(传至第8代)；培养基中添加LIF和SCF的同时,添加肝素和胰岛素,更有利于细胞的传代(传至第9代)；山羊类ES细胞中SSEA-1(Stage-specific embryonic antigens-1)和Oct-4免疫组化染色呈阳性,在体外培养时可以分化为上皮样细胞、空泡样细胞和跳动的类心肌细胞.成功分离得到能自然分化成不同类型细胞的山羊类ES细胞.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄海军		10	15	2.0	3.0
2	高其双		21	67	4.0	7.0
3	蒋思文	华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室	65	1142	21.0	32.0
4	刘艳	华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室	5	19	1.0	4.0
5	邓兵	华中农业大学动物遗传育种与繁殖教育部重点实验室	4	7	1.0	2.0