TRAF6-GST融合蛋白在大肠杆菌中的表达及纯化

• 作者: 关薇 唐刘君 孙利 杨晓明 汪思应 王建 王晓辉
• 来源期刊: 生物技术通讯
• 学科: 生物学
• 关键词: 肿瘤坏死因子受体相关因子6 原核表达 蛋白纯化
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 679-682
• 分类号: Q78
• 字数: 2879字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0002.2011.05.018

摘要

目的:在大肠杆菌中表达肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)与GST的融合蛋白并进行纯化.方法:采用PCR方法从肝文库中扩增编码TRAF6的DNA片段,将其插入原核表达载体pGEX-4T-2,构建GST-TRAF6原核表达载体,并转入大肠杆菌BL21(DE3)中,用IPTG诱导表达；用谷胱甘肽-琼脂糖珠亲和纯化表达的GST-TRAF6融合蛋白.结果:酶切鉴定和测序分析显示,长为1569 bp的TRAF6 DNA片段在pGEX-4T-2-TRAF6中的碱基序列、插入位点及读框正确,且位于表达载体的GST序列下游；经IPTG最佳浓度0.5 mmol/L诱导表达、亲和纯化后,获得了相对分子质量约85×103的GST-TRAF6融合蛋白.结论:构建了重组GST-TRAF6原核表达载体,获得了GST-TRAF6的大肠杆菌BL21表达菌株及GST-TRAF6融合蛋白,利于深入研究TRAF6的功能.