抗人神经肽Y单克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 丁克祥 丁宇 丁振华 孙乐 孙哲 尹晴 左夏林 杨永鹏 董萍 韩晋云
• 来源期刊: 国际老年医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 人神经肽Y 多肽合成 BALB/c小鼠 单克隆抗体 制备 鉴定
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 原著
• 页码范围: 145-150
• 分类号: R339.21
• 字数: 4324字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7593.2011.04.001

摘要

目的:建立抗人神经肽Y(NPY)的单克隆抗体细胞株,方法:用合成的hNPY多肽偶联KLH免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0融合,用ELISA法筛选出阳性克隆,经克隆化后建立抗人NPY杂交瘤细胞株,并对得到的单抗进行亚类、效价、纯度、亲和常数以及结合位点的测定和分析,结果:获得了3株稳定分泌抗hNPY单抗杂交瘤细胞株,IgG亚类鉴定分别为IgG3、IgG26、IgGI,腹水效价为1:20万～1.200万,纯化抗体效价为0.05 μg/ml～0.0005μg/ml,4A8抗体纯度达到95%以上,抗体亲和常数分别为5.27 x 106 L/mol,3.39 x 106 L/mol,1.05 x 107 L/mol,不同单抗配对经时间分辨免疫荧光法检测结果提示3株单抗是针对不同抗原决定簇,结论:成功制备了3株抗hNPY单抗,为研究NPY及其抗体在脂肪移植及肥胖治疗中的机制和应用奠定基础.