猪圆环病毒2型特异性荧光定量PCR检测方法的建立与应用

• 作者: 刘洋 刘涛 吴家强 吴晓燕 周顺 时建立 李俊 王金宝 韩偲
• 来源期刊: 家畜生态学报
• 学科: 农学
• 关键词: 猪圆环病毒2型 SYBR Green I 荧光定量PCR 特异性
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 科学研究
• 页码范围: 41-46
• 分类号: S811.5
• 字数: 4009字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-1182.2011.02.010

摘要

研究旨在建立基于SYBR Green I荧光定量PCR检测PCV 2的技术方法.根据GenBank中的猪圆环病毒2型(PCV 2)的基因序列(HQ148879),设计一对特异性引物,利用普通PCR技术扩增出PCV 2的ORF2基因702bp片段,并克隆到pVAX1载体,以纯化的质粒作为PCR检测的标准模板,以10倍梯度稀释质粒为阳性标准品,摸索荧光定量PCR试验,并绘制标准曲线,以此建立一种荧光定量PCR特异性检测猪圆环病毒的方法.结果表明,该方法对PCV 2有很好的特异性,其敏感性比常规PCR高100倍,批间与批内重复试验变异系数均小于2.5%.经临床应用表明荧光定量PCR方法的建立实现了对PCV 2特异性的快速诊断和定量检测.