羊细粒棘球蚴病抗体间接ELISA检测方法的建立

• 作者: 于琳琳 侯绍华 刘丹 朱鸿飞 柏丽华 贾红
• 来源期刊: 畜牧兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 羊细粒棘球蚴病 EG95s 重组融合蛋白 间接ELISA 检测
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 预防兽医
• 页码范围: 65-70
• 分类号: S852.734
• 字数: 4673字
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在通过建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法,为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段.作者利用DNAStar软件对GenBank上发表的细粒棘球蚴EG95蛋白的氨基酸序列进行分析,筛选出高度亲水的优势表位区EG95s,对该区域编码基因进行克隆并表达.以纯化的重组融合蛋白为包被抗原,按常规方法建立检测羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA,并对各种条件进行优化.SDS-PAGE结果表明成功获得了可溶性好、表达效率高、纯化简便的重组融合蛋白GST-1EG95s和HIS-1EG95s,Western blot检测结果表明表达产物具有较好的反应原性.间接ELISA方法优化结果显示:HIS-1EG95s作为包被抗原效果优于GST-1EG95s.经统计学分析,确定间接ELISA方法的判定标准:OD450nm值≥0.235时判定为阳性,OD450nm值≤0.191时判定为阴性,介于二者之间则为可疑.分别对采自新疆的70份羊包虫阳性血清和70份阴性血清进行检测,结果表明该方法与新西兰Wallaceville动物研究中心提供的间接ELISA方法符合率为100%,阻断试验结果显示与其他蛋白无交叉反应,批内变异系数介于3.8%～5.6%,批间变异系数介于5.7%～8.5%,结果表明该方法特异性强、敏感性高、重复性好.作者所建立的羊细粒棘球蚴病抗体的间接ELISA检测方法有望为羊细粒棘球蚴病的检测提供快速、简便的手段.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	朱鸿飞	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室	55	257	8.0	13.0
2	刘丹	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室	33	339	11.0	18.0
3	侯绍华	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室	28	124	6.0	10.0
4	贾红	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室	28	129	6.0	10.0
5	于琳琳	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室	2	17	1.0	2.0
6	柏丽华	中国农业科学院北京畜牧兽医研究所动物医学研究室	4	37	4.0	4.0