3种水产病原菌简型基因芯片检测技术的建立

• 作者: 李晨 王秀华 谢国驷 赵培 黄倢
• 来源期刊: 中国海洋大学学报（自然科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 基因芯片 水产病原菌 检测
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 37-42
• 分类号: S917
• 字数: 3877字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-5174.2011.03.006

摘要

根据水产养殖中常见的3种病原菌鳗弧菌(Vibrio anguillarum)、嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)及迟缓爱德华氏菌(Edwardsiella tarda)的研究资料,筛选3个毒力相关基因toxR、aerA、evpA设计引物和探针,构建简型基因芯片,并使用对虾白斑病综合征病毒(WSSV)variable region的PCR荧光标记产物作为表面化学质控.通过已构建和优化的多重PCR反应条件,获得了3个目的基因的PCR产物;经过芯片制作过程的优化,将探针以终浓度20μmol/L溶于50%DMSO,在室温、相对湿度45%的条件下点印于醛基基片表面.扩增的PCR产物与杂交液混合后,在42℃杂交2 h就可检测到理想的杂交信号.芯片的灵敏度试验结果表明,可以检测到的3种水产病原菌的最低模板DNA为:鳗弧菌3×102拷贝、嗜水气单胞菌5×103拷贝、迟缓爱德华氏菌6×101拷贝.该芯片可成功应用于患病大菱鲆内脏的细菌分离物的鉴定.