多重荧光定量PCR甄别3种霍乱弧菌相关毒素基因

• 作者: 叶菊莲 吴方 张政 程苏云 罗芸 金大智 金郁
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 多重实时荧光定量PCR 霍乱弧菌 毒素
• 年，卷（期）: 2011,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1065-1070
• 分类号: R378.3
• 字数: 6363字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.12.001

摘要

目的 为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子,研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法.方法 针对霍乱弧菌ctxA、ace、zot基因设计引物和探针,建立PCR体系,对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定,采用直接测序方法对鉴定结果进行验证.结果 建立的多重实时荧光定量PCR方法可同时准确、特异地鉴定霍乱弧菌菌体携带的3种毒素基因,不携带毒素基因的菌株均未出现阳性检测结果.菌体检测的最低检出限度ctxA基因:102 CFU/mL,ace基因和zot基因:10 CFU/mL.构建了3种毒素相关基因阳性质粒,ace基因和zot基因的最低检出限度为10 copies/μL,ctxA基因的最低检出限度为102 copies/μL,定量检测批间和批内的变异系数均小于5％；对70株霍乱弧菌分离株进行评价,结果显示其中40株(57.2％)携带ctxA毒素基因、31株(44.3％)携带ace毒素基因、46株(65.7％)携带zot毒素基因,通过测序方法验证,符合率达到100％.结论 本文建立的多重实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性好、灵敏度高,为霍乱弧菌的现场流行病学调查和疫情监测提供了快速、可靠的鉴定工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	叶菊莲		50	250	9.0	12.0
2	罗芸		56	262	10.0	12.0
3	程苏云		72	743	14.0	24.0
4	张政		65	309	10.0	13.0
5	金大智		25	68	5.0	6.0
6	金郁	辽宁师范大学实验中心	7	52	4.0	7.0