携带GFP绿色荧光标记的重组BAC-HSV-1HF株的构建及其子代病毒的特性研究

• 作者: 刘新静 卢甲盟 宋波 王青志 许予明 韩志强
• 来源期刊: 病毒学报
• 学科: 医学
• 关键词: 细菌人工染色体 单纯疱疹病毒Ⅰ型 同源重组
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 238-243
• 页数: 6页
• 分类号: R373.9
• 语种: 中文

摘要

本研究旨在构建由细菌人工染色体(Bacteria artificial chromosome,BAC)携带的单纯疱疹I型病毒质粒及携带绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein,GFP)的重组型BAC-HSV-1感染性子代病毒.构建了携带HSV-1同源臂的质粒C223-UL43左臂-UL47右臂.将该质粒线性化后与HSV-1基因组共转染至Vero细胞,通过真核细胞内同源重组产生了含有GFP报告基因的BAC-HSV-1重组病毒,噬斑纯化筛选出阳性重组病毒,并再次感染Vero细胞,Hirt法提取BAC-HSV-1环形基因组并将其电穿孔入DH10B感受态细胞,由PCR和酶切法鉴定BAC-HSV-1质粒.为研究BAC-HSV-1子代病毒的生物学特性,将实验组和对照组细胞分别给予BAC-HSV-1质粒和HSV-1基因组DNA,收取病变细胞的上清液,以MOI=0.1再次感染Vero细胞,半数组织培养感染剂量(50%tis-sue culture infective dose,TCID50)法测定两组的病毒滴度.PCR和酶切法分别鉴定BAC-HSV-1,结果示BAC-HSV-1构建成功.TCID50法测定实验组和对照组病毒滴度,经统计学分析两组病毒滴度间差异无统计学意义(P＞0.05).本研究成功地构建了真核细胞和原核细胞间穿梭的HSV-1-BAC重组病毒/质粒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	许予明	郑州大学第一附属医院/郑州大学第一临床学院	209	955	14.0	21.0
2	宋波	郑州大学第一附属医院/郑州大学第一临床学院	88	465	11.0	18.0
3	卢甲盟	郑州大学第一附属医院/郑州大学第一临床学院	12	102	4.0	10.0
4	韩志强	郑州大学第一附属医院/郑州大学第一临床学院	14	14	2.0	3.0
5	刘新静	郑州大学第一附属医院/郑州大学第一临床学院	8	5	1.0	2.0
6	王青志	郑州大学第一附属医院/郑州大学第一临床学院	2	0	0.0	0.0