人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证

• 作者: 于宝利 安礼友 成勇 杨廷佳 袁玉国
• 来源期刊: 扬州大学学报（农业与生命科学版）
• 学科: 农学
• 关键词: 人乳铁蛋白 双标记基因 双启动子 小鼠 胎儿成纤维细胞 荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 页码范围: 6-10
• 分类号: Q782|S188
• 字数: 3379字
• 语种: 中文

摘要

构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞.结果表明:小鼠受体妊娠率28.5％,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5％).构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9 mg·mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6 mg·mL-1.构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100％都有GFP的表达.以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础.