肠出血性大肠杆菌O157:H7△hly△stx△toxB基因缺失株的构建

• 作者: 何孔旺 俞正玉 倪艳秀 叶青 吕立新 周俊明 张雪寒 李彬 栾晓婷 温立斌 王小敏 茅爱华 赵攀登 郭容利
• 来源期刊: 华北农学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 肠出血性大肠杆菌O157 H7 hly stx toxB 缺失株 小鼠 粘附
• 年，卷（期）: 2011,（5）
• 页码范围: 76-82
• 分类号: Q78
• 字数: 4712字
• 语种: 中文

摘要

肠出血性大肠杆菌(Enterohemorrhagic Escherichia coli)O157:H7是食源感染的人兽共患病原菌.志贺毒素(Shiga toxin,Stx)、溶血素(haemolysin,Hly)和ToxB是O157:H7重要的毒力因子.选用自杀性质粒pMEG375,体外构建具有同源臂的重组自杀性质粒,借助于sm10宿主菌获得O157:H7杂交菌株,通过同源重组,依次获得O157:H7(△hly△stx△toxB基因缺失株,△hly△stx△toxB接种HEp-2细胞和感染链霉素处理的Balb/c小鼠,明确缺失株粘附定植的能力.经PCR鉴定,hly、stx和toxB基因分别被壮观霉素(Spc+)、庆大霉素(Gm+)和卡那霉素(Kan+)基因表达盒所代替,Western blot鉴定结果显示,O157:H7(△hly△stx△toxB检测不到相应的Stx、Hly和ToxB蛋白.O157:H7(△hly△stx△toxB生长特性与亲本株无明显差异.对于HEp-2细胞的粘附能力明显降低.Balb/c小鼠排菌时间和排菌量明显减少和降低.本研究成功获得O157:H7(△hly△stx△toxB),并且明确Stx、Hly和ToxB的缺失导致了O157:H7对HEp-2细胞和Balb/c小鼠的粘附和定植能力降低.本研究旨在为研制EHEC O157:H7基因缺失疫苗奠定物质基础.