人14-3-3γ基因的腺病毒载体的构建及其在PC12细胞中的表达

• 作者: 孙圣刚 王埮 王淑荣 袁昆雄 陈小武 陈志斌
• 来源期刊: 神经解剖学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 14-3-3γ 腺病毒载体 基因治疗 PC12细胞 人
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 页码范围: 44-49
• 分类号: R3
• 语种: 中文

摘要

目的:构建携带人14-3-3 γ基因的重组腺病毒表达载体并确定其对PC12细胞的感染效率.方法:采用PCR方法,从Top10/pHis-14-3-3 γ质粒中扩增14-3-3 γ DNA序列,将14-3-3 γ基因定向克隆到穿梭质粒载体pAdTrack-CMV,经与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1载体同源重组后得到携带人14-3-3γ基因的重组腺病毒(pAd/14-3-3 γ),采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定,转染HEK293细胞进行包装和扩增,氯化铯密度梯度离心法纯化,半数组织培养感染剂量(50%tissue culture infective dose,TCID50)方法测定重组腺病毒的滴度.体外感染PC12细胞,荧光显微镜观察绿色荧光蛋白(GFP)和Western Blot检测14-3-3γ蛋白的表达.结果:克隆得到人14-3-3γ基因,经PCR鉴定和测序证实结果正确,成功构建得到高滴度的重组腺病毒,并能高效感染PC12细胞.结论:本实验成功构建了表达14-3-3 γ的复制缺陷型重组腺病毒Ad-14-3-3,为用14-3-3 γ基因治疗帕金森病奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孙圣刚	华中科技大学附属协和医院神经内科	360	2154	21.0	28.0
2	王淑荣	海南医学院附属医院神经内科	39	169	7.0	9.0
3	陈志斌	海南医学院附属医院神经内科	130	544	12.0	15.0
4	王埮	海南医学院附属医院神经内科	47	261	8.0	13.0
5	陈小武	海南医学院附属医院神经内科	21	94	6.0	8.0
6	袁昆雄	海南医学院附属医院神经内科	10	33	4.0	5.0