不同荧光定量PCR分析方法检测大鼠脑缺血再灌注损伤中Caspase-3基因的表达研究

• 作者: 万海同 朱振洪 李金辉
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 荧光定量PCR 相对定量 绝对定量 Caspase-3 脑缺血/再灌注
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 388-393,333
• 分类号: Q78
• 字数: 5170字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2011.03.021

摘要

目的:应用实时荧光PCR检测大鼠脑缺血/再灌注损伤组织中的Caspase-3基因表达变化,并比较了相对定量与绝对定量分析方法的技术优劣.方法:相对定量实验中,以β-actin基因作为内参,采用Delta-delta Ct法计算目的基因表达变化.而在绝对定量实验中,构建了含Caspase-3基因的重组质粒,以该重组质粒作标准品,构建标准曲线并计算样品组中Caspase-3基因拷贝数.结果:相对定量数据表明相对于假手术组,Caspase-3基因在模型组中的表达上调了7.52倍,而在治疗组1和2中分别上调了4.20倍和3.07倍.绝对定量实验结果表明假手术组Caspase-3基因拷贝数为1.42×105 copies/μL,模型组中该基因为8.06×105 copies/μL,基因上调了5.68倍,而治疗组1和2中该基因拷贝数分别为3.83×105 copies/μL和3.59×105 copies/μL,分别上调了2.71和2.52倍.结论:两种定量分析方法表明Caspase-3基因在模型组中和治疗组中变化趋势基本一致.绝对定量方法更精确,但需要标准品,所花费成本高.而相对定量方法虽然简便,但需要看家基因作为内参,存在一定误差,如何保证目的基因与内参基因扩增效率一致性是关健.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	万海同	浙江中医药大学生物工程学院	257	1519	20.0	26.0
2	朱振洪	浙江中医药大学生物工程学院	49	168	7.0	11.0
3	李金辉	浙江中医药大学生物工程学院	19	170	7.0	13.0