水稻瘤矮病毒S3和S8基因共表达杆状病毒转移载体构建及重组病毒的鉴定

• 作者: 吴祖建 林奇英 范国成 谢联辉 谢荔岩 高芳銮 黄美英
• 来源期刊: 《福建农林大学学报（自然科学版）》
• 关键词: 水稻瘤矮病毒 外层衣壳蛋白 内层衣壳蛋白 杆状病毒表达系统 Sf9昆虫细胞
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 生命科学
• 页码范围: 151-155
• 分类号: S432.1
• 语种: 中文

摘要

为构建携带水稻瘤矮病毒(Rice gall dwarf virus,RGDV)主要内层衣壳蛋白S3基因和外层衣壳蛋白S8基因的重组杆状病毒,将目的基因(S3和S8)分别亚克隆到杆状病毒转移载体pFastBacDual多角体启动子(PH)和p10启动子的下游.经酶切和确证性序列测定,将其转化到DH10Bac感受态细胞中,获得重组杆粒rbpFBDS3-S8,采用脂质体转染法,将rbpFBDS3-S8转染草地贪夜蛾(Spodoptera frugiperda)Sf9细胞包装病毒,PCR筛选鉴定重组病毒.结果表明:Sf9昆虫细胞被侵染72 h后,倒置显微镜下观察到细胞增大,培养液和细胞内出现颗粒状物质,部分细胞破裂甚至裂解,说明S3和S8基因已整合到重组杆状病毒基因组中,这为开展RGDV主要结构蛋白在昆虫细胞中的表达及其功能研究奠定了基础.