小干扰RNA沉默Toll样受体4表达对慢性温和应激ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞TLR4/NF-κB途径基因表达的影响

• 作者: 唐朝克 唐雅玲 杨永宗 覃丽 顾洪丰
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 小干扰RNA Toll样受体4 慢性温和应激 核因子κB 肿瘤坏死因子α
• 年，卷（期）: 2011,（1）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 6-12
• 分类号: R363
• 语种: 中文

摘要

目的 探讨小干扰RNA(siRNA)沉默Toll样受体4(TLR4)基因对慢性温和应激ApoE-/-小鼠腹腔巨噬细胞促炎症细胞因子表达的影响.方法 针对小鼠TLR4基因设计2条siRNA和一条无关序列,再据每一序列合成两条互补并含siRNA正反义链的DNA,退火后与含GFP的载体pRNAT-H1.1/Adeno相连,转染293A细胞,实时荧光PCR筛选有效的一条siRNA,经腺病毒颗粒包装与病毒扩增并感染293A细胞,G418筛选后,挑取单个阳性克隆放大培养,检测病毒滴度.120只雄性ApoE-/-小鼠随机分为三组:(1)慢性温和应激组;(2)慢性温和应激+siRNA组(10 μL/只,尾静脉注射,每5日一次);(3)慢性温和应激+腺病毒空载体组.每组ApoE-/-小鼠40只,实验动物都以高脂、高胆固醇饲料喂养,分别在接受慢性温和应激0、4、12周后3个时间点处死动物,收集小鼠腹腔单核巨噬细胞,以Western Blotting方法检测其TLR4和核因子κB(NF-κB)蛋白表达,ELISA法检测腹腔单核巨噬细胞培养上清液白细胞介素1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子α表达.结果 转染siRNA1和siRNA2后的292A细胞中TLR4 mRNA表达水平较空白对照组分别下降56%和67%,逐孔稀释滴度测定法测定的病毒滴度为3.4×1014 TU/L;遭受4、12周慢性温和应激后,ApoE-/-小鼠血浆中皮质醇激素显著升高,但在同一时间点内,各组ApoE-/-小鼠血浆皮质酮激素浓度相比,差异没有统计学意义(P>0.05);与同一时期慢性温和应激组相比,siRNA组腹腔巨噬细胞TLR4和核因子κB蛋白表达水平明显降低 (均P<0.05),其培养细胞上清液中的白细胞介素1β和肿瘤坏死因子α含量显著减少(P<0.01).结论 siRNA沉默TLR4基因能有效抑制TLR4 /NF-κB-IL-1β 和肿瘤坏死因子α的表达,提示TLR4/ NF-κB途径在慢性温和应激诱导的慢性炎症应答中可能有着重要作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	唐朝克	南华大学心血管病研究所	95	749	15.0	22.0
2	杨永宗	南华大学心血管病研究所	125	1252	19.0	29.0
3	覃丽	南华大学药理学教研室	25	74	6.0	7.0
4	唐雅玲	南华大学心血管病研究所	19	74	5.0	8.0
5	顾洪丰	南华大学心血管病研究所	15	96	6.0	9.0