A组牛轮状病毒基因工程亚单位疫苗的初步研究

• 作者: 仲跻峰 何洪彬 杨宏军 杨少华 王长法 马跃宁 高运东
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 牛轮状病毒 基因工程亚单位疫苗 LTB
• 年，卷（期）: 2011,（6）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 506-510
• 分类号: R373.2
• 字数: 3353字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2011.06.011

摘要

目的 构建轮状病毒外膜蛋白VP4、VP7基因与大肠杆菌LTB蛋白基因的重组表达载体,研究重组表达蛋白的免疫原性,为研制犊牛腹泻基因工程亚单位疫苗奠定基础.方法 克隆A组牛轮状病毒临床分离株CHLY的VP4、VP7基因和大肠杆菌LTB基因,插入pET32a中构建了4个原核表达载体pET32a/VP7、pET32a/VP4、pET32a/VP7-LTB、pET32a/VP4-LTB,转化到BL21(DE3)中进行表达纯化,纯化蛋白与弗氏佐剂混合免疫10 w龄雌鼠,在实验期间对雌鼠进行交配,对其所产乳鼠用150 μL105.5/0.1 mL TCID50的轮状病毒进行攻毒以研究重组蛋白免疫原性和攻毒保护性.结果 重组蛋白在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式存在,Bandscan扫描分析结果 显示,它们分别占菌体总蛋白的35%、20%、30%、18%,利用Ni-NTA Agarose在变性条件下成功纯化得到高纯度重组蛋白.10 w龄雌鼠免疫试验表明rVP4-LTB组激发了最强的免疫反应,rVP4组次之,rVP7-LTB组略高于rVP7,各个免疫组间的差异性不显著(P>0.05),各实验组IgG抗体水平显著高于空质粒对照组(P<0.01).雌鼠所产乳鼠的攻毒实验表明,免疫组雌鼠所产乳鼠腹泻率为13.35%～23.8%,腹泻持续时间为48h～72h,较空质粒对照组明显降低,腹泻症状较轻且症状持续时间明显缩短.四个重组蛋白组攻毒保护率为76.2%～86.7%,rVP7-LTB、rVP4-LTB两组略高于rVP7、rVP4组,但相互间差异不显著(P>0.05).结论 重组蛋白具有较好的免疫原性,被免疫雌鼠体内产生的中和性抗体可以经被动免疫过程传递至子代,并为仔鼠提供保护.本研究为犊牛轮状病毒基因工程疫苗的研究奠定了一定的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长法	山东省农业科学院奶牛研究中心	107	675	13.0	18.0
2	仲跻峰	山东省农业科学院奶牛研究中心	137	888	15.0	20.0
3	高运东	山东省农业科学院奶牛研究中心	72	515	12.0	18.0
4	杨宏军	山东省农业科学院奶牛研究中心	52	203	9.0	11.0
5	杨少华	山东省农业科学院畜牧兽医研究所	48	391	12.0	17.0
7	何洪彬	山东省农业科学院奶牛研究中心	59	320	10.0	13.0
10	马跃宁	山东大学威海分校海洋生物学院	3	17	3.0	3.0