Rac1蛋白调控表皮干细胞迁移促进创面愈合的研究

• 作者: 曹川 李世荣 柴琳琳 毕胜 甘露 赵树文
• 来源期刊: 中华烧伤杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 干细胞 慢病毒属 Rac1蛋白 突变体 创面愈合
• 年，卷（期）: 2011,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 205-209
• 分类号: R752.53
• 字数: 3409字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1009-2587.2011.03.015

摘要

目的 观察Rac1蛋白对表皮干细胞(ESC)迁移运动的调控作用,为完善创面愈合的基础理论以及指导临床应用提供参考.方法 将慢病毒空载体FUGW单独和分别与Rac1蛋白抑制型突变体Rac1T17N、Rac1蛋白活化型突变体Rac1Q61L融合后转染入ESC,按照随机数字表法分为3部分进行如下实验.(1)将ESC分别接种于Ⅰ型胶原溶液(20 μg/mL)、Ⅳ胶原溶液(20 μg/mL)或纤连蛋白溶液(10 μg/mL)包被的24孔细胞培养板,采用CytoTox 96 比色试剂盒检测ESC对不同基质的黏附率.(2)选取上述黏附于Ⅳ型胶原的1000个ESC,四甲基异硫氰酸罗丹明标记的鬼笔环肽染色,激光扫描共聚焦显微镜下观察黏附细胞的形态延展并比较面积大小.(3)选用Transwell小室,上室加入ESC、下室中加入含基质细胞衍生因子1(SDF-1)的限定性角质形成细胞无血清培养液(以不加SDF-1的培养液为对照),倒置相差显微镜下观察ESC的趋化能力,结果以细胞迁移变化率表示.(4)将ESC接种于6孔细胞培养板孵育12 h,加入含4 μg/mL丝裂霉素C的培养液继续孵育2 h,于单层贴壁细胞划痕,6、12 h后统计剩余划痕宽度百分率.对数据进行t检验.结果 与转染FUGW的ESC比较,转染Rac1Q61L的ESC对Ⅰ型胶原的黏附率明显增加(t＝5.302,P<0.05),转染Rac1T17N的ESC对Ⅰ型胶原(t＝13.741,P<0.05)、Ⅳ型胶原(t＝15.676,P<0.05)及纤连蛋白(t＝8.256,P<0.05)的黏附率均明显下降.激光扫描共聚焦显微镜下观察,与转染FUGW的ESC比较,转染Rac1Q61L的ESC面积明显增大,细胞边缘有层板状伪足伸出;转染Rac1T17N的ESC面积显著缩小.在趋化因子SDF-1作用下,与转染FUGW的ESC比较,转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率升高43.4%,转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降78.0%;无SDF-1作用时,与转染FUGW的ESC比较,转染Rac1T17N的ESC迁移变化率下降55.2%,转染Rac1Q61L的ESC迁移变化率未见明显变化(升高1.7%).划痕后6、12 h,转染Rac1Q61L的ESC剩余划痕宽度百分率分别为(39±9)%、(6±5)%,低于转染FUGW的ESC[(43±5)%,t=1.027,P>0.05;(18±7)%,t=4.389,P<0.05];划痕后6、12 h,转染Rac1T17N的ESC剩余划痕宽度百分率分别为(81±9)%、(71±11)%,明显高于转染FUGW的ESC(t值分别为11.386、11.726,P值均小于0.05).结论 Rac1蛋白可通过影响ESC的黏附、延展以及趋化能力调控细胞迁移,并可能因此参与ESC促进创面愈合的进程.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李世荣	第三军医大学西南医院整形外科	244	1394	18.0	22.0
2	曹川	第三军医大学西南医院整形外科	86	468	12.0	16.0
3	柴琳琳	第三军医大学西南医院整形外科	21	83	6.0	8.0
4	毕胜	第三军医大学西南医院整形外科	31	169	8.0	11.0
5	赵树文	广东省清远市中医院普通外科	2	3	1.0	1.0
6	甘露		1	2	1.0	1.0