猪瘟病毒C株全长cDNA感染性克隆的构建及病毒拯救

• 作者: 宁宜宝 徐璐 朱元源 王琴 范学政 范运峰 赵启祖 邹兴启
• 来源期刊: 中国农业科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪瘟病毒 C株 感染性克隆构建 拯救方法 传代
• 年，卷（期）: 2011,（2）
• 所属期刊栏目: 兽医
• 页码范围: 409-416
• 分类号: S855.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2011.02.022

摘要

[目的]建立猪瘟病毒研究技术平台,为进一步研究猪瘟病毒c株在细胞中的增殖机制及猪瘟病毒标记疫苗奠定基础.[方法]本试验以猪瘟病毒C株为研究材料,经RT-PCR扩增获得涵盖全长的6个片段,用合适的酶切位点连接,成功构建了c株全长感染性克隆pAC-CS.体外转录得到RNA,然后将其分别转染BHK-21和SK6细胞.拯救的病毒通过上清传代(常规病毒传代)和带毒细胞传毒繁殖.[结果]通过RT-PCR、免疫过氧化酶单层细胞试验和兔体发热试验检测,表明病毒拯救成功.经比较以电转的方式转染SK6的效果较好.通过带毒细胞传代,至12代时病毒滴度稳定达10'TCID50·mL-1,而上清传代至第3代时用免疫过氧化酶单层细胞试验(IPMA)不能检测出病毒.[结论]成功构建了猪瘟病毒C株感染性克隆;拯救C株时以SK6细胞电转较好;带毒细胞传代培养C株有利于获得较高滴度的病毒.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	徐璐		24	169	8.0	11.0
2	范学政		43	501	11.0	21.0
3	王琴		59	698	14.0	23.0
4	宁宜宝		119	1253	19.0	30.0
5	范运峰		9	50	4.0	7.0
6	赵启祖		40	290	9.0	15.0
7	邹兴启		25	138	7.0	10.0
8	朱元源		17	105	6.0	9.0