茶树花青素还原酶基因在大肠杆菌中的表达及优化

• 作者: 刘亚军 单育 卢忠尉 叶辉 夏涛 王云生 王弘雪 陈啸天 骆洋 高丽萍
• 来源期刊: 茶叶科学
• 学科: 农学
• 关键词: 茶树 花青素还原酶 原核表达 酶活性
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 页码范围: 326-332
• 分类号: S571.1|Q554
• 字数: 4119字
• 语种: 中文

摘要

茶树花青素还原酶是催化非酯型儿茶素EC和EGC合成的关键酶.采用RT-PCR技术,获得了茶树花青素还原酶基因的开放阅读框,它编码含337个氨基酸的蛋白质,推测分子量为37 kD,等电点为6.54;成功地将该基因重组到表达载体pET32a(+)上,并在大肠杆菌rosetta中进行原核表达;优化了原核表达中诱导时间、诱导温度、IPTG浓度、氨苄青霉素浓度,纯化出目的蛋白.HPLC检测表明,目的蛋白具有ANR酶活性.