斑马鱼Foxp4基因多克隆抗体的制备及检测

• 作者: 刘华友 吴秀山 朱玲 李帆 李永青 江志钢 王琨
• 来源期刊: 激光生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Foxp4 原核表达 多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2011,（4）
• 所属期刊栏目: 技术研究
• 页码范围: 556-559,489
• 分类号: Q812
• 字数: 3032字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-7146.2011.04.024

摘要

Foxp4为Fox基因家族的一员,目前研究发现其与肺、肠、心脏以及中枢神经系统的发育有关.为了在斑马鱼模型中进一步研究该基因的功能,有必要制备其多克隆抗体.按照巢式PCR原理,经过两次PCR扩增出亲水性和特异性均好的斑马鱼Foxp4基因片段,将其克隆人表达载体pGEX4T-1,转化至大肠杆菌BL21中,再通过1PTG进行诱导表达GST-Foxp4融合蛋白.融合蛋白先经谷胱甘肽琼脂糖珠亲和纯化,再经切胶纯化回收,然后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,分别进行Western-blot实验检测抗体效价和特异性.所得结果显示获得了较高效价和特异性好的斑马鱼Foxp4多克隆抗体,为Foxp4功能的进一步研究奠定了基础.